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牛羊布病虎紅平板凝集抗原的使用方法及注意事項

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虎紅平板凝集試驗(RBT,Rose Bengal Test)是國際貿(mào)易中牛、羊、豬布魯氏菌病檢測的指定試驗,在我國也用于人布魯氏菌病監(jiān)測的初篩?乖墙(jīng)培養(yǎng)滅活后,離心收集菌體用虎紅染料染色后懸浮于乳酸緩沖液中制成。由于所用的抗原是酸性( PH3.6-3.9 )帶色的抗原,該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性、檢查的抗體是IgG類,因此提高了反應(yīng)的特異性。該方法靈敏度高,操作方便,檢測快速且價格便宜,適于動物群體布魯氏菌病的普查。

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗具體操作方法如下:

一、材料準(zhǔn)備

1、布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原、布魯氏菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、布魯氏菌陰性血清。

2、受檢血清應(yīng)新鮮,無明顯蛋白凝塊,無溶血和腐敗。

3、潔凈的玻片或玻璃板。在其上劃分成4cm2的方格。

4、微量移液器及無菌吸頭。

5、干凈牙簽或火柴桿。

二、操作方法

1、在玻璃板各方格標(biāo)記受檢血清編號,然后加入相應(yīng)的血清25μL(動物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/ 18646-2018)。

2、在各待檢血清旁滴加虎紅抗原25μL。

3、用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原,涂成2cm直徑的圓形,于4分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

三、結(jié)果判定

在標(biāo)準(zhǔn)陰性血清不出現(xiàn)凝集、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清出現(xiàn)凝集時,試驗成立,方可對受檢血清進行判定。凡出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者(“+”以上反應(yīng))判為陽性。

虎紅平板凝集試驗判定標(biāo)準(zhǔn):

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“—”無凝集,呈均勻粉紅色

“+”稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色。

“++”形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮。

“+++”凝集反應(yīng)較強,液體較清亮。

“++++”凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮。

四、注意事項

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原儲藏溫度:2-8℃,使用前需充分搖勻,務(wù)必恢復(fù)至室溫或18度以上后再檢測。

試驗應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清對照。

布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗抗原說明書2019版.pdf



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