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易于引起Pcr實驗室污染四種關(guān)鍵因素概述

Pcr實驗室*為普遍關(guān)鍵的污染因素,中海生物技術(shù)小編總結(jié)有下述四方面:

因素①Pcr試劑污染

關(guān)鍵因素是在配制Pcr試劑的過程中,樣品槍/容器/雙蒸水等溶液被Pcr核酸模板污染。

因素②Pcr擴(kuò)增產(chǎn)物污染

它是Pcr反應(yīng)中*重要并是*普遍的污染因素。畢竟Pcr產(chǎn)物的大拷貝量大概為1013拷貝/毫升,大大超過Pcr檢測幾個拷貝的極限,極少量的Pcr產(chǎn)物就能引起假陽性,產(chǎn)生假陽性。

另一種易于被忽略且*有可能導(dǎo)致Pcr產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染。當(dāng)空氣摩擦液體表面時,會產(chǎn)生浮質(zhì)。當(dāng)實際操作中劇烈搖動反應(yīng)管時,開啟蓋子,吸取樣品,用污染注射槍反復(fù)吸取樣品,會產(chǎn)生氣溶膠并被污染。據(jù)測算,一個氣溶膠粒子可以包含48,000個拷貝,所以它引起的污染是一個需要特別留意的問題。

因素③標(biāo)本之間的交叉污染

標(biāo)本的污染主要包含采集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本置放時因密封不嚴(yán)而溢出容器外,或容器外有標(biāo)準(zhǔn)本粘著,引起標(biāo)本之間的交叉污染;核酸模板提取過程中,加樣槍污染導(dǎo)致樣本間污染;部分微生物標(biāo)本,尤其是病毒,可以隨氣溶膠傳播或產(chǎn)生氣溶膠,引起相互污染。

因素④克隆質(zhì)粒的污染

此問題在分子生物學(xué)實驗室和部分克隆質(zhì)粒作為陽性對照的實驗中也很普遍。由于單位體積克隆質(zhì)粒的含量相當(dāng)高,再加上純化過程需要更多的工具和試劑,活細(xì)胞中的質(zhì)粒因其生長繁殖的簡單性和活力,很可能被污染。

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