布氏桿菌病是一種由布魯氏菌引起的人獸共患動物源性*性傳染病，它是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的B類動物疫病，我國也將其列為二類動物疫病之首。該病不僅阻礙我國畜牧業(yè)的發(fā)展，同時對人體健康產(chǎn)生重大影響，21世紀(jì)由于畜間布病的影響，我國人間布病的發(fā)病率有所提高，國家適時出臺了《畜間布魯氏菌病防控五年行動方案（2022—2026年）》，確定了到2026年，我國牧場個體陽性率控制在0.4%以下，群體陽性率控制在7%以下的總體目標(biāo)。為達(dá)成目標(biāo)離不開檢測技術(shù)的支持，現(xiàn)階段布病的檢測方法較多：如虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）、補體結(jié)合試驗（CFT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等。但虎紅平板凝集試驗（RBPT）還是應(yīng)用最廣泛的檢測手段。

2、虎紅平板凝集試驗又稱為班氏孟加拉紅平板凝集試驗。由于所用的抗原是酸性(PH3.6-3.7)帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的lgM類抗體的凝集活性、檢查的抗體是lgG類，因此提高了反應(yīng)的特異性。

2、采血應(yīng)規(guī)范、自然出清、且勿添加抗凝血劑，被檢血清應(yīng)新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味。

3、潔凈玻璃板，其上劃分成4c㎡小格并做好與家畜相應(yīng)的標(biāo)號或者使用凝集試驗板。

4、吸管或移液器，適于滴加30μL（0.03mL）液體。移液器的規(guī)格*為5-50μL，確保劑量的準(zhǔn)確。

5、準(zhǔn)備牙簽供攪拌用，確保每個樣本都使用單獨牙簽。

6、稱取0.5克苯酚（俗稱石炭酸），加入100ml的生理鹽水中，配置后高壓鍋中121℃高壓30分鐘。

2、將玻璃板上各方格標(biāo)記被檢血清號，然后加相應(yīng)被檢血清30μL（0.03mL）。

3、在被檢血清旁滴加虎紅平板凝集抗原30μL（0.03mL）。

4、用牙簽類小棒攪動血清和抗原，使之充分混合，在4分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，確保每個樣本血清使用單獨的牙簽。

5、每次試驗應(yīng)設(shè)陰性血清、陽性血清對照。

2、受檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性(+)，無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性(-)。一定注意超過4min沒有判定意義。

3、在觀察時可將玻璃板或凝集板進(jìn)行搖動使混合液流動，更利于結(jié)果的觀察。

4、如下圖1號為陰性，2號為陽性。如家畜未接種布病疫苗，則陽性者為感染布氏桿菌病。

2、抗原在室溫放置30min-60min進(jìn)行回溫，利于抗原與抗體的結(jié)合。

3、在早晨喂料前或停食后6小時進(jìn)行采血，空腹血清出現(xiàn)假陽性少。采集血液樣本時不要加抗凝劑，以免影響對檢測結(jié)果做出正確的判定。

4、本試驗溫度在室溫22±4℃進(jìn)行結(jié)果更加準(zhǔn)確，一定溫度范圍內(nèi)，溫度越高，血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行的越快。因此，在試驗前要注意環(huán)境溫度是否適合進(jìn)行本試驗。

5、凡是試驗中凝集顆粒不規(guī)則，大小不勻，片狀或絮狀，凝集不清澈者，一般為假陽性，否則凝集顆粒規(guī)則大小均勻，凝集清澈者為陽性。

6、抗原的質(zhì)量是影響布病血清學(xué)試驗結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵性因素之一，一定要采購正規(guī)廠家、產(chǎn)品穩(wěn)定、經(jīng)國家認(rèn)可的產(chǎn)品。運輸過程中要2-8℃冷鏈運輸，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。

7、對于未操作過該試驗的人員，每次進(jìn)行檢測的樣本數(shù)量不宜超過5個，并且抗原*統(tǒng)一加到血清旁，最后分別用牙簽進(jìn)行混勻。