酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒是酶免疫測定中廣泛應用的技術(shù)。基本方法是將已知的抗原或抗體吸附到固相載體的表面，使酶標記的抗原和抗體在固相表面反應，并用洗滌法洗去液相中的游離成分。常用的ELISA酶聯(lián)免疫吸附法包括雙抗體夾心法和間接法。前者用于檢測大分子抗原，而后者用于檢測特異性抗體。
酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，不改變抗體的免疫特性或影響酶的生物活性。這種酶標記的抗體可以特異性地結(jié)合抗原或吸附在固相載體上的抗體。滴加底物溶液后，底物可以在酶的作用下將其氫供體從無色還原形式變?yōu)橛猩趸问剑瑥亩a(chǎn)生顯色反應。因此，相應免疫反應的存在與否可以通過底物的顯色反應來確定，并且顯色反應的深度與樣品中相應抗體或抗原的量成比例。這種顏色反應可以使用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測器進行定量測量，該試劑盒檢測器將酶化學反應的敏感性與抗原抗體反應的特異性相結(jié)合，使酶聯(lián)免疫測定試劑盒方法成為一種特異而靈敏的檢測方法。
酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒操作步驟
1.確定本試驗所需的酶聯(lián)抗體涂層孔的數(shù)量。
2.將0.1ml稀釋的標準樣品依次加入一排7孔中，每孔只加入樣品稀釋液作為對照。處理后，每孔添加100μl樣品。
3.在酶聯(lián)板上加一個蓋子，在37℃下反應90分鐘。
4.反應結(jié)束后，使用自動洗板機將液體從酶標板上去除；或者，抖掉酶聯(lián)板上的液體，在吸水紙上拍幾下。清洗兩次。
5.按每孔0.1ml的順序加入制備的生物素抗體工作液。在37℃下反應60分鐘。
將6.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡約1分鐘。
7.按每孔0.1ml的順序加入制備好的ABC工作溶液。在37℃下反應30分鐘。
用8.0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡約1-2分鐘。
9.依次向每個孔中加入0.1ml TMB顯色工作液，在37℃下進行暗反應。在反應過程中，有必要定期觀察。當標準樣品的前3-4孔具有肉眼可見的清晰的藍色梯度，并且最后3-4孔之間的差異不顯著時，可以添加0.1ml/孔的TMB終止溶液。（顯色反應不應超過30分鐘）。
10.使用酶聯(lián)免疫吸附測定法在450nm處測量O.D.值。
11.根據(jù)樣品的吸光度值，在坐標中找到相應的濃度。用戶還可以使用各種應用軟件進行計算。需要記住的是，由于樣品稀釋了N倍，實際濃度應為×N
