細(xì)胞因子試劑盒主要用于科學(xué)研究,不用于臨床診斷,但可用于檢測(cè)各種指標(biāo)。在進(jìn)行快速測(cè)試時(shí),要測(cè)試的樣本越多,添加錯(cuò)誤的概率就越高。特別容易出錯(cuò)的是在將酶連接的綴合物與樣品或標(biāo)準(zhǔn)溶液混合的階段,因?yàn)槭褂玫氖菃螛尅J聦?shí)上,解決方案相對(duì)簡(jiǎn)單。我們只需要改變操作順序,即先將供試品溶液或標(biāo)準(zhǔn)溶液加入稀釋井中,然后加入酶聯(lián)綴合物,以避免出現(xiàn)錯(cuò)誤。此外,這兩個(gè)序列的交叉不會(huì)影響結(jié)果,因?yàn)檫@一步驟的主要目的是徹底混合兩種液體。
細(xì)胞因子試劑盒從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)單性、安全性和經(jīng)濟(jì)性等方面進(jìn)行了全面評(píng)估。靈敏度有兩個(gè)含義,一是試劑檢測(cè)少量被測(cè)物質(zhì)的能力;試劑在大量樣本中檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的能力。特異性通常用交叉反應(yīng)速率來(lái)表示。含有與被測(cè)物質(zhì)相似結(jié)構(gòu)部分的物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng),這會(huì)增加檢測(cè)結(jié)果并導(dǎo)致假陽(yáng)性。因此,交叉反應(yīng)是評(píng)估其質(zhì)量的一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)。精密度一般指批內(nèi)CV%,應(yīng)小于15%;定量試劑應(yīng)同時(shí)檢查線性范圍。準(zhǔn)確性:通過(guò)添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。
細(xì)胞因子試劑盒在測(cè)試前的工作:
1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘將試劑盒從冰箱中取出,并將其平衡至室溫。
2.用二次蒸餾水(1:25)稀釋濃縮洗滌液。將未使用的溫度恢復(fù)到4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有晶體,這是一種正常現(xiàn)象。在制備洗滌液之前,可以在40℃的水浴中稍微加熱以溶解晶體(加熱溫度不應(yīng)超過(guò)50℃,使用時(shí)洗滌液應(yīng)在室溫下)。在同一天使用。
3.標(biāo)準(zhǔn)品:在10000×離心機(jī)上離心1分鐘,在冷凍干燥的標(biāo)準(zhǔn)品中加入1.0mL標(biāo)準(zhǔn)品和樣品稀釋液,擰緊蓋子,靜置10分鐘,倒置數(shù)次,等待其完全溶解。用移液管輕輕混合(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進(jìn)行多次稀釋?zhuān)ㄗ⒁猓翰灰苯釉诜磻?yīng)井中進(jìn)行多次稀釋?zhuān)。建議配制以下濃度:根據(jù)稀釋方法圖例,直接使用標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋液作為空白孔0ng/mL。如果制備5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取上述標(biāo)準(zhǔn)品0.5mL10ng/mL,加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品和樣品稀釋劑的EP管中。充分混合,其他濃度將相應(yīng)計(jì)算。
4.生物素化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)前實(shí)驗(yàn)所需的量(以100μL/孔規(guī)為基準(zhǔn)),實(shí)際制備時(shí)應(yīng)額外制備100-200μL使用前15分鐘,稀釋生物素化抗體稀釋液,將生物素化病毒抗體(1:100)濃縮至工作濃度。在同一天使用。
5.酶綴合物工作溶液:在實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)前實(shí)驗(yàn)所需的量(按100μL/孔徑計(jì)的順序),實(shí)際制備時(shí)應(yīng)額外制備100-200μL使用前15分鐘,用酶結(jié)合物稀釋劑將HRP酶結(jié)合物(1:100)稀釋濃縮至工作濃度。