免疫染色包括免疫熒光（IF）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）等。您可以參考以下步驟進(jìn)行操作。
樣品制備
對(duì)于粘附細(xì)胞：
可以使用多孔板（例如6孔板、24孔板）直接培養(yǎng)細(xì)胞，然后在預(yù)定時(shí)間固定以進(jìn)行后續(xù)操作。
你也可以使用一個(gè)干凈的蓋玻片，將其浸泡在70%的乙醇中，用無(wú)菌鑷子將其放置在6孔板中，然后用無(wú)菌鹽水、PBS或培養(yǎng)液沖洗掉剩余的乙醇。此時(shí)，可以種植細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在細(xì)胞附著在蓋玻片上并生長(zhǎng)良好后，可以進(jìn)行后續(xù)操作，如固定。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：
細(xì)胞首先固定在固定溶液中，然后滴到載玻片上。干燥后，細(xì)胞緊緊地粘附在載玻片上。然后可以繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作。如果細(xì)胞的粘附能力較差，則可以在載玻片上處理諸如PDL之類的物質(zhì)以增強(qiáng)載玻片的粘附能力。
對(duì)于冷凍切片：
在將切片放置在載玻片上之后，可以直接執(zhí)行諸如固定之類的后續(xù)操作。
對(duì)于石蠟切片：
脫蠟：切片在二甲苯中脫蠟5分鐘，然后用新鮮的二甲苯代替進(jìn)行脫蠟。二甲苯共用于脫蠟3次。無(wú)水乙醇5分鐘，兩次。90%乙醇5分鐘，兩次，70%乙醇5分鐘一次。蒸餾水5分鐘，兩次。
抗原修復(fù)：根據(jù)不同的抗原和抗體，您可以選擇將切片放置在以下抗原修復(fù)溶液中：10mM檸檬酸鈉，pH6.0，或1mM EDTA，pH8.0，或10mM Tris，pH10.0，在95℃下加熱12分鐘，并在約30分鐘內(nèi)緩慢冷卻至室溫。
固定的
細(xì)胞或切片可以使用適當(dāng)?shù)墓潭ㄈ芤汗潭�，例如BIOLEBO（YT086）的免疫染色固定溶液。固定后，可以使用免疫染色洗滌劑（YT089）清洗兩次，每次5分鐘。
關(guān)
加入免疫染色封閉溶液（YT087）并封閉60分鐘。如果背景較高，可以在4℃下密封過(guò)夜。
在從密封開(kāi)始的所有步驟中，重要的是要注意樣品的水分含量，避免干燥，否則極易產(chǎn)生高背景。
在整個(gè)免疫染色過(guò)程中，我們建議使用側(cè)擺振動(dòng)器。側(cè)擺速度相對(duì)較慢，也很容易讓溶液覆蓋樣本。如果樣品相對(duì)容易脫落，也可以將所有步驟放在桌面上進(jìn)行靜態(tài)操作，即密封、抗體孵育、洗滌和其他步驟而不搖晃，但建議在靜態(tài)操作期間適當(dāng)延長(zhǎng)動(dòng)作時(shí)間或次數(shù)。
*抗體孵育
參照*抗體說(shuō)明書(shū)，用免疫染色*抗體稀釋劑（YT088）按適當(dāng)比例稀釋*抗體。
用微型臺(tái)式真空泵吸走密封液，立即加入稀釋后的*抗體，在室溫或4℃下，在側(cè)擺搖壺上緩慢搖一搖，孵育一小時(shí)。如果*抗體孵育一小時(shí)的效果不理想，可以在4℃下慢慢搖晃，孵育過(guò)夜。
回收*個(gè)抗體。加入免疫染色洗滌劑，在側(cè)搖臺(tái)上緩慢搖晃5分鐘。吸收所有洗滌液后，加入洗滌液并洗滌5分鐘�？偣睬逑�3次。如果結(jié)果背景較高，則可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。
二次抗體孵育
參照第二抗體的說(shuō)明書(shū)，用免疫熒光染色第二抗體稀釋劑（YT090）以適當(dāng)比例稀釋熒光標(biāo)記的第二抗體，或用免疫熒光著色（非熒光）第二抗體稀釋液（YT091）稀釋辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、生物素或堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的第三抗體。
用微型臺(tái)式真空泵吸出洗滌液，立即加入稀釋后的第二抗體，在室溫或4℃下，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，孵育1小時(shí)。
回收第二種抗體。加入免疫染色洗滌劑，在側(cè)搖臺(tái)上緩慢搖晃5分鐘。吸收所有洗滌液后，加入洗滌液并洗滌5分鐘�？偣睬逑�3次。如果結(jié)果的背景較高，則建議適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。