支原體會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重危害。同時(shí)，其發(fā)生率高，不易用肉眼察覺。據(jù)報(bào)道，在細(xì)胞培養(yǎng)室中，其平均發(fā)病率甚至可以高達(dá)63%。在生物制品中，其發(fā)病率為1%-3%。
有五種可能污染細(xì)胞的支原體來(lái)源：
1.環(huán)境
2.受污染的細(xì)胞
3.攜帶人體表面（如嘴、鼻子、皮膚等）
4.實(shí)驗(yàn)試劑，如培養(yǎng)基、胰蛋白酶等
5.實(shí)驗(yàn)室儀器未徹底消毒
支原體檢測(cè)的傳統(tǒng)方法是什么？
方法1：培養(yǎng)法。直接將待測(cè)樣品涂覆在支原體的液體或固體培養(yǎng)基上，使其生長(zhǎng)。通常，需要幾個(gè)星期才能看到*液體變渾濁或*菌落生長(zhǎng)。培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)最經(jīng)典的方法。其優(yōu)點(diǎn)是：靈敏度適中，結(jié)果可靠。然而，培養(yǎng)方法的主要缺點(diǎn)之一是時(shí)間周期太長(zhǎng)，不能用作細(xì)胞污染的快速檢測(cè)方法。
方法2：DNA熒光染色。熒光染料（如Hoechst 33258，DAPI）可以與細(xì)胞和支原體的DNA結(jié)合。被支原體污染的細(xì)胞染色后，如果細(xì)胞核外和細(xì)胞周圍能看到許多大小均勻的熒光點(diǎn)，即支原體的DNA，則證明存在支原體污染。該方法比培養(yǎng)法快，但靈敏度差。當(dāng)通過(guò)熒光染色檢測(cè)到支原體時(shí)，去除支原體相對(duì)困難。
方法3：掃描電子顯微鏡。拍攝細(xì)胞樣本的掃描電子顯微鏡照片。如果被支原體污染，細(xì)胞表面可以看到密集的小顆粒。這種方法不適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試，因?yàn)樗�使用電子顯微鏡。
方法4：PCR。PCR相對(duì)快速和靈敏。這是目前實(shí)驗(yàn)室中最常用的支原體檢測(cè)方法。然而，PCR方法也有其致命的缺點(diǎn)：細(xì)胞培養(yǎng)基的上清液中經(jīng)常含有強(qiáng)烈抑制PCR擴(kuò)增的代謝物。由于許多研究人員直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液的上清液進(jìn)行PCR檢測(cè)，如果檢測(cè)結(jié)果為陰性，則認(rèn)為沒(méi)有支原體污染。事實(shí)上，還有一種可能性是，PCR的擴(kuò)增受到細(xì)胞代謝產(chǎn)物的抑制，而不是沒(méi)有支原體污染！
一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)丟棄受污染的細(xì)胞，以避免成為污染源。但對(duì)于珍貴的細(xì)胞，可以使用Minerva Biolabs的Mynox®或Mynox Gold®過(guò)去，其他品牌的支原體清除劑只是抑制劑，抑制了支原體的DNA合成和蛋白質(zhì)合成，但無(wú)法殺死。Mynox®是市場(chǎng)上*具有殺滅效果的清道夫。它是從枯草芽孢桿菌中提取出來(lái)的，可以特異性地與支原體膜結(jié)合，破壞膜的通透性，導(dǎo)致支原體的擴(kuò)張和破裂并死亡。使用Mynox®通常，清潔任務(wù)可以在2-3小時(shí)內(nèi)完成。
Mynox Gold®是Mynox®，經(jīng)過(guò)四個(gè)療程治療。每個(gè)療程是一代細(xì)胞。它包括Mynox®，還含有復(fù)合*成分。過(guò)去，其他品牌的支原體清除劑只是支原體的*成分，但也容易產(chǎn)生耐藥性。Mynox Gold®Mynox®與*相結(jié)合，它結(jié)合了兩者的優(yōu)點(diǎn)，并消除了兩者的缺點(diǎn)，因?yàn)槟承┘?xì)胞對(duì)Mynox®治療敏感，而Mynox Gold™比Mynox®更溫和，對(duì)細(xì)胞毒性小，因此更適合脆弱和營(yíng)養(yǎng)不足的細(xì)胞。