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如何更準確地檢測豬瘟抗體


豬瘟是中國主要的動物疫病。我國對豬瘟的防控主要采取豬瘟疫苗免疫策略,抗體檢測是評價免疫效果的主要手段。目前,世界動物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測方法為ELISA檢測法和熒光抗體中和試驗。熒光抗體中和試驗對試驗條件和操作人員要求高,耗時長。它只適合專業(yè)實驗室檢測少量樣本,不適合推廣應用。因此,可以說,ELISA是國際公認的*適合大規(guī)模應用的豬瘟抗體檢測方法。
在評估ELISA檢測方法時,兩個最重要的指標是敏感性和特異性,兩者之間存在一定的矛盾。當檢測方法的靈敏度高時,它必然會失去某些特異性;同樣,當特異性要求高時,它必然會失去一些敏感性。因此,對于一個好的檢測方法,我們必須找到靈敏度和特異性的*平衡點和結(jié)合點。目前,用于豬瘟抗體檢測的ELISA方法主要有阻斷ELISA和間接ELISA兩種原理。阻斷ELISA使用單克隆抗體,因此檢測的特異性更高;間接ELISA更注重敏感性。
阻斷ELISA和間接ELISA在實際應用中都是合理的。然而,鑒于我國豬瘟大規(guī)模強制免疫的現(xiàn)狀,如何在不同應用領域選擇合適的試劑盒成為一個重要問題。因此,本文主要介紹了間接ELISA試劑盒與進口阻斷ELISA試劑盒在臨床應用中的比較研究,以幫助讀者在實際生產(chǎn)中選擇更合適的檢測試劑。
試劑盒開發(fā)原則的差異
阻斷試劑盒基于液相阻斷原理,反應孔的顏色與血清中的抗體含量成反比。阻斷ELISA使用單克隆抗體檢測,可以大大提高檢測的特異性,但實際檢測對象僅針對具有單一表位的抗體(作為特異性抗體檢測)。因此,當陽性血清中針對該表位的抗體的豐度不高時,檢測的靈敏度會降低(會出現(xiàn)假陰性結(jié)果)。
間接試劑盒基于間接ELISA原理。反應孔的顏色與反應板中結(jié)合的特異性抗體的量成正比。因為間接ELISA檢測針對抗原蛋白的多克隆抗體(豬體內(nèi)的總抗體),它將提高檢測的靈敏度。
兩種試劑盒與熒光抗體病毒中和試驗的符合率分析
熒光抗體病毒中和試驗(FVNT)是OIE推薦的方法,也是檢測豬瘟抗體的“金標準”。一項臨床試驗表明,兩種ELISA抗體檢測試劑盒檢測結(jié)果不同的283份血清樣本均通過FVNT法進行了確認和測試。結(jié)果表明,間接試劑盒與FVNT的符合率為69.26%,阻斷試劑盒與FVNT的符合率是28.62%。不符合樣品的確認結(jié)果表明,直接試劑盒能夠更真實地反映接種后的中和抗體水平,而阻斷試劑盒對陽性血清的檢測有明顯的遺漏。

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