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關(guān)于布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)細(xì)節(jié)問(wèn)題
虎紅平板凝集試驗(yàn)（Rose Bengal test）是布魯氏桿病血清學(xué)診斷的經(jīng)典初篩試驗(yàn)。
OIE《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊(cè)》規(guī)定虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)的主要
步驟
《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊(cè)》規(guī)定虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)的主要步驟
（1） 試驗(yàn)前首先將抗原、待檢血清樣品及陰陽(yáng)性對(duì)照血清平衡至室溫（22±4℃）。整個(gè)實(shí)驗(yàn)要求在室溫（22±4℃）下進(jìn)行。必須將抗原及血清平衡至室溫，否則會(huì)降低試驗(yàn)的敏感性。
（2）吸取 25-30µL 血清樣品至“白色背景”的瓷磚、釉或塑料材質(zhì)的反應(yīng)板上。
（3）輕柔振搖虎紅抗原試劑瓶，使其均質(zhì)，吸取等體積的抗原加至靠近血清樣品的白色背景的反應(yīng)板上。
（4）用潔凈的玻璃或塑料棒將血清與抗原“迅速同時(shí)混勻”形成 2cm 直徑的圓形或橢圓形。在 OIE
布魯氏菌病參考實(shí)驗(yàn)室，使用虎紅專(zhuān)用混勻設(shè)備，將血清和抗原混勻成圓形，一次可同時(shí)混勻 48 個(gè)血清樣品。OIE
要求所有血清樣品及抗原需同步混勻，并形成 2cm 直徑的圓形或橢圓形。
（5）置 3D（圓形）或 2D（橢圓形）混勻器混勻 4min；混勻“4min 立即”觀察結(jié)果。
（6）判定結(jié)果：白色背景、自然光下觀察，嚴(yán)禁在任何燈光下觀察，出現(xiàn)“肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象”者判為陽(yáng)性。
（7）每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照血清，且 OIE 規(guī)定“陽(yáng)性對(duì)照血清要求為弱陽(yáng)性（+或++）”（見(jiàn)下圖）,便于弱陽(yáng)性血清樣本的判別以降低假陰性的誤判，進(jìn)而用試管凝集試驗(yàn)復(fù)檢。
國(guó)標(biāo) GB/T18646-2002 《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》主要步驟
（1）國(guó)標(biāo)中未明確規(guī)定實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度；而 OIE 對(duì)環(huán)境溫度嚴(yán)格要求。
（2）國(guó)標(biāo)中血清及抗原加樣于玻璃板上，結(jié)果判定在玻璃板上進(jìn)行，并非白色背景。
（3）國(guó)標(biāo)中使用牙簽類(lèi)小棒將血清和抗原“逐個(gè)”混勻成橢圓形，一次最多只能做 10 個(gè)血清樣品，而且很難做到同步混勻。
（4）國(guó)標(biāo)規(guī)定混勻“4min 內(nèi)”觀察結(jié)果。 （5）國(guó)標(biāo)中未對(duì)陰陽(yáng)性血清的凝集結(jié)果進(jìn)行要求，僅說(shuō)明“在陰陽(yáng)性血清對(duì)照實(shí)驗(yàn)成立的條件下，對(duì)被檢血清進(jìn)行判定”。 |
