自2020年10月，上�？祆`發(fā)布“非洲豬瘟高靈敏度PCR試劑盒”（以下簡稱高靈敏度試劑盒）以來，其突出的靈敏度、敏感性、特異性和穩(wěn)定性迅速得到了廣大豬場實驗室的認(rèn)可。隨著熒光PCR相關(guān)技術(shù)的普及和用戶群體的增加，一些以前不被重視的問題逐漸出現(xiàn)。在本文中，我們將討論“假陽性”問題，這是所有制造商都沒有意識到的一點，以及相應(yīng)的解決方案。
事實上，“假陽性”問題在熒光PCR領(lǐng)域并不少見，假陽性的原因也很復(fù)雜：如操作不當(dāng)污染、環(huán)境氣溶膠污染或試劑生產(chǎn)過程污染。本文要討論的“假陽性”主要是指試劑特異性導(dǎo)致的假陽性。換句話說，本文中提到的“假陽性”與操作者、儀器和環(huán)境無關(guān)，只與試劑盒中的試劑有關(guān)。那么，試劑盒中的“假陽性”與什么有關(guān)呢？在整個商業(yè)化的非鼠疫病毒PCR檢測試劑盒中，都會提到一個重要的參數(shù)——特異性。
什么是特異性？在PCR擴增過程中，如果我們要擴增的非洲豬瘟DNA片段在整個DNA鏈上出現(xiàn)不止一次，或者樣本中混合的其他物種、細(xì)胞或病毒的DNA含有類似的DNA片段，那么其他片段可能會被擴增。那么儀器顯示的陽性結(jié)果不一定是由非經(jīng)典發(fā)熱病毒DNA引起的，因此陽性結(jié)果也變成假陽性。因此，一般來說，特異性反應(yīng)是試劑盒擴增特定DNA片段的性能。特異性越低，試劑盒擴增其他片段的概率越大，即“假陽性”的概率越高。
在市場上銷售的許多非瘟疫病毒PCR檢測試劑盒中，大多數(shù)制造商將其試劑盒的特異性標(biāo)記為>99%，至少不低于98%�？祆`的高靈敏度試劑盒也是如此，其特異性可達(dá)99.9%。確實已經(jīng)達(dá)到了極限。盡管PCR技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到目前為止，但由于模板DNA的不確定性，仍無法保證*的特異性。因此，特異性的問題，即假陽，被忽視了。
在為客戶服務(wù)的過程中，我們發(fā)現(xiàn)，很多客戶在非瘟疫病毒檢測中遇到極弱樣本或疑似樣本時，對于陽性領(lǐng)域往往遵循“殺錯不放過”的原則，而對于陰性領(lǐng)域，往往會帶來心理恐慌，需要確認(rèn)是否陽性。事實上，隨著非瘟疫浪潮的到來，每個測試單元的工作量前所未有地翻了一番。再次進(jìn)行全面審查顯然是對人力和成本的巨大考驗。面對如此大的環(huán)境，快靈人陷入了沉思。
“為什么我們寧愿殺錯人？”
“真的沒有辦法消除假陽嗎？”
有了這樣一個問題，我們開始了新一輪的嘗試：提高試劑盒的靈敏度，將特異性從99%提高到99.9%……也許我們可以拓寬視野，超越簡單的擴增？