病原學(xué)診斷是生豬養(yǎng)殖中豬支原體肺炎疾病診斷的有效措施，主要是通過在無菌的條件下收集患病豬只肺臟病變部位的組織材料，隨后在A26液體培養(yǎng)基或者固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，肺炎支原體的初次分離通常使用液體培養(yǎng)基，分離后轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基中，肺炎支原體的培養(yǎng)難度較大，通常菌落很小，肺炎支原體菌落通常呈圓形，呈現(xiàn)為半透明的灰白色，邊緣整齊，同時中間出現(xiàn)乳頭狀的突起，菌落的表面出現(xiàn)許多小的菌落顆粒，大小在200μm左右。肺炎支原體菌落在液體培養(yǎng)過程中可以通過使用酚紅指示劑看是否出現(xiàn)顏色變化來判斷菌體是否正常生長。通過使用姬姆薩染色可以對菌落進(jìn)行分離診斷，染色后可以發(fā)現(xiàn)呈纖細(xì)的車輪狀、戒指狀等多種形態(tài)的病原。

豬支原體肺炎疾病的血清學(xué)診斷措施可以對疾病進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷，是現(xiàn)階段生豬養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)中常見的實(shí)驗(yàn)室診斷措施，血清學(xué)診斷方法主要分為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、熒光抗體試驗(yàn)以及免疫酶結(jié)合技術(shù)等。其中補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中與患病豬只的臨床癥狀及病理變化相結(jié)合，可以有效的對疾病進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)主要包括微管補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和微量修正補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，檢測診斷的陽性率與患病豬只的肺部病變有良好的相關(guān)性，但是依舊會出現(xiàn)一定的假陽性和假陰性的情況，所以需要與患病豬只的臨床癥狀表現(xiàn)以及病理變化狀況結(jié)合來進(jìn)行疾病的確診。

間接血凝試驗(yàn)是豬支原體肺炎疾病常見的血清學(xué)診斷措施，具有良好的特異性和敏感性，但是由于受到病原感染的豬只血清中可能含有特異性的吸附因子，進(jìn)而導(dǎo)致溶血的情況，影響診斷的準(zhǔn)確性。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是通過檢測患病豬只血清中的肺炎支原體抗體，具有可以進(jìn)行定量分析，敏感性和特異性高的優(yōu)勢特點(diǎn)，是目前生豬養(yǎng)殖疾病診斷中應(yīng)用最為廣泛的血清學(xué)診斷方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)相比補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和間接血凝試驗(yàn)的抗體效價(jià)高10～30倍，同時對患病后期的生豬檢測中，抗體效價(jià)依舊在很高的水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在豬只感染病原后的2周內(nèi)即可檢測到相應(yīng)的抗體，通常在3～5周左右可以獲得良好的敏感性，對于接種感染的患病豬只，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在接種后1年還能檢測到抗體。

熒光抗體技術(shù)使用于生豬養(yǎng)殖中急性型支原體肺炎疾病感染的診斷，此時患病豬只肺部出現(xiàn)大量的支原體病原，而在急性型支原體肺炎患病豬只癥狀獲得緩解，或者逐漸轉(zhuǎn)化為慢性型時，由于患病豬只機(jī)體中支原體病原數(shù)量較少，使用熒光抗體技術(shù)容易導(dǎo)致假陰性的情況。

免疫酶檢測技術(shù)是用酶聯(lián)免疫過氧化物和間接過氧化物酶試驗(yàn)來對患病豬只肺部組織中肺部支原體進(jìn)行檢測，避免了前文中熒光抗體試驗(yàn)檢測中不能有效檢測慢性豬只等缺陷。使用免疫酶檢測技術(shù)制作冰凍切片或者患病豬只支氣管涂片時，可以發(fā)現(xiàn)支原體病原被染色為紅褐色的不規(guī)則顆粒。研究發(fā)現(xiàn)，通過使用甲醛固定后，再使用石蠟包埋，利用間接過氧化物酶試驗(yàn)可以檢測肺炎支原體，使用顯微鏡即可觀察到結(jié)構(gòu)清晰的支原體病原，同時樣品還能長時間保存，用于后續(xù)的進(jìn)一步檢測工作，相比熒光抗體檢測方法更加敏感，所以對于沒有新鮮患病豬只組織樣品時可以采取免疫酶檢測技術(shù)進(jìn)行疾病的診斷。