將抗原呈遞細(xì)胞、抗原和抗原特異性T雜交瘤細(xì)胞混合并在96孔板中一起孵育。一段時(shí)間后，抗原呈遞的作用可以通過(guò)測(cè)量上清液中抗原特異性T雜交瘤細(xì)胞分泌的IL-2水平來(lái)反映。如果是可溶性抗原，可選擇DC作為APC；如果是顆�？乖蛑|(zhì)包衣抗原，則應(yīng)選擇巨噬細(xì)胞作為APC，所選APC應(yīng)具有與T雜交瘤細(xì)胞相同的MHC結(jié)合特性。
主要試劑和設(shè)備
1.APC（此處選擇腹膜滲出細(xì)胞）、T雜交瘤細(xì)胞、抗原。
2.DMEM培養(yǎng)基，96孔平底培養(yǎng)板。
3.IL-2 ELISA試劑盒
4.離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱。
操作步驟
1.收集腹膜滲出細(xì)胞，用DMEM×106/ml將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至2，加入96孔平底培養(yǎng)板中，每孔100μl
2.收集新鮮培養(yǎng)的T雜交瘤細(xì)胞，并在室溫下以1000rpm離心10分鐘。用預(yù)熱至37℃×106/ml的DMEM培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至2加入96孔培養(yǎng)板，每孔50μl
3.制備1mmol/L抗原工作液，用DMEM溶液連續(xù)稀釋，一般以對(duì)數(shù)（1:10）或半對(duì)數(shù)（1:3.16）稀釋為宜。
4.向96孔板中加入一系列稀釋的抗原溶液，每孔50μl每種濃度進(jìn)行三次再穿孔，陰性對(duì)照不含抗原。
5.將96孔板置于37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中20~24小時(shí)。
6.取出96個(gè)孔板，以1200rpm離心10分鐘。
7.吸取上清液，在-80℃冷凍測(cè)試，或直接使用IL-2 Elisa試劑盒或細(xì)胞生物學(xué)方法檢測(cè)上清液中IL-2的含量。
注意事項(xiàng)
1.制備抗原溶液并進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，應(yīng)將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱中。
2.當(dāng)合成肽用作抗原時(shí)，肽應(yīng)溶解在去離子水中。1mmol/L工作溶液在4℃下可儲(chǔ)存數(shù)天。應(yīng)避免將肽溶解在鹽水緩沖溶液中，因?yàn)辂}會(huì)導(dǎo)致肽沉淀。如果將蛋白質(zhì)用作抗原，可將蛋白質(zhì)直接溶解在DMEM培養(yǎng)基中以立即使用。
3.APC、抗原和T雜交瘤細(xì)胞可以以任何順序加入。
