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熒光酶聯(lián)免疫吸附法應(yīng)用中的幾個(gè)問題

多種實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)證實(shí),熒光酶聯(lián)免疫吸附救援具有較高的靈敏度,但如果不很好地掌握,它還可能帶來高背景染色,并且可能有多種因素影響最終產(chǎn)物的酶結(jié)合位點(diǎn)的沉積,因?yàn)樵摮练e過程是復(fù)雜化學(xué)反應(yīng)和物理變化的綜合結(jié)果。在ELF的反應(yīng)過程中,容易形成假熒光晶體,削弱FISH信號(hào),導(dǎo)致非特異性晶體沉積在組織細(xì)胞表面,產(chǎn)生背景信號(hào)。試驗(yàn)結(jié)果證實(shí),只要延長(zhǎng)ELF的反應(yīng)時(shí)間,就可以避免背景染色。
有三種方法可以避免熒光酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的背景染色。
1.商用試劑盒中提供延遲試劑。
2.向顯色溶液中加入4%PVP。
3.顯色時(shí)間應(yīng)控制在15~30min。

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