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膠體金快速檢測技術(shù)在豬瘟凈化方面的應(yīng)用

豬瘟(Classical swine fever CSF)是由豬瘟病毒引起的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病,是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定的必須報(bào)告的疫病。該病以發(fā)病急、持續(xù)高熱、全身出血和白細(xì)胞減少為特征,發(fā)病率和死亡率高,豬是其*的易感宿主。


豬瘟對世界各國的養(yǎng)豬業(yè)都產(chǎn)生過嚴(yán)重的影響,例如97年荷蘭爆發(fā)的急性豬瘟導(dǎo)致政府撲殺生豬1200萬頭,直接經(jīng)濟(jì)損失就超過20億美元。


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一、豬瘟病毒


豬瘟病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬成員,病毒形態(tài)呈圓形,有囊膜,直徑40~60nm,衣殼呈二十面體對稱,內(nèi)含單股正鏈RNA基因組,病毒核酸長約12300個(gè)核苷酸。豬瘟病毒對環(huán)境的抵抗力不強(qiáng),對干燥、紫外線和脂溶劑均敏感,但是排泄物和組織中的豬瘟病毒抵抗力很強(qiáng),如糞便中的病毒能在20℃環(huán)境下存活2周,豬肉中的病毒能夠存活數(shù)月乃至一年。


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二、目前流行狀況


據(jù)中國獸藥監(jiān)察所豬瘟參考實(shí)驗(yàn)室介紹,我國雖無豬瘟大爆發(fā),但是31個(gè)省市均有豬瘟散發(fā)和流行,造成的經(jīng)濟(jì)損失依然很嚴(yán)重。在全面實(shí)施豬瘟強(qiáng)制免疫的壓力下,我國非典型、慢性、隱性豬瘟在逐漸增加。


另外,雖豬瘟疫苗免疫率超過95%以上,但豬瘟免疫合格率也并不像想象中樂觀。中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心對2010-2014年全國149個(gè)豬場共計(jì)9534份血清的監(jiān)測顯示,不同的豬群豬瘟抗體陽合格率從41.57%-67.43%。


豬群抗體合格率在不同地區(qū)、豬場、不同豬群之間差異明顯,離散度大。一個(gè)群體抗體合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆發(fā)。種母豬群要求合格率在95%以上;種公豬和后備種豬群要求達(dá)到*合格率。而有些豬場免疫后保護(hù)水平顯然不足以抵抗野毒感染。


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三、豬瘟凈化首先要控制傳染源


如要做到豬瘟凈化,首先要控制傳染源。但是,各種報(bào)告和報(bào)道中顯示,不僅病豬/病料中有豬瘟病毒,即便外觀健康的豬群也經(jīng)?梢詸z測到豬瘟病毒。


另外,也有研究顯示,種公豬的精液也存在豬瘟病毒感染情況。即使是未發(fā)病的健康豬場,種公豬的精液也有4%的感染率;發(fā)病豬場公豬精液的感染率高達(dá)30%。


對于健康豬群帶毒的原因,臨床上豬瘟流行株具有強(qiáng)、中、低不同致病性毒株,是多種因素綜合影響的結(jié)果。而這種帶毒將會造成豬場豬瘟的惡性循環(huán)。比如通過種母豬、種公豬水平或垂直傳播,使整個(gè)群體都在擴(kuò)散,先天感染的仔豬會形成免疫耐受。


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這種隱性帶毒沒有癥狀的特征,對豬瘟的控制產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響,所以有些豬場豬瘟病毒一直清除不掉。由于豬瘟病毒主要損傷豬的淋巴器官,對淋巴器官的損傷是持續(xù)性的、不可恢復(fù)的,因此感染的豬再打疫苗也沒有作用。不清除病毒,通過免疫方法凈化豬瘟的效果是難以保證的。因此應(yīng)當(dāng)從源頭上將帶毒豬淘汰。


扁桃體是檢測慢性豬瘟一個(gè)最敏感最方便的組織之一,但是活體采扁桃體比較困難,所以很多豬場只有在發(fā)病時(shí)才檢測豬瘟抗原,平時(shí)只檢測豬瘟抗體。對于一般豬場尤其是中小型豬場而言,即使采扁桃體樣品檢測豬瘟抗原,也只能送到各檢測中心去檢測,因?yàn)楝F(xiàn)行的豬瘟抗原的檢測方法主要是熒光染色、各種PCR方法(比如熒光定量PCR、套式或普通PCR)等。這些法對人員、環(huán)境、設(shè)備等要求比較高,中小型的豬場通常不具備條件且豬瘟病毒感染率常常超過大型的養(yǎng)殖企業(yè)。


膠體金快速檢測試劑通過紙層析來完成抗原抗體的快速反應(yīng),操作簡單、快速,對人員、環(huán)境、設(shè)備等無要求,非常適合基層或現(xiàn)場進(jìn)行檢測。人醫(yī)臨床或家庭常用的早早孕試紙條就是膠體金檢測試劑的一種。


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賽諾利康生物有限公司開發(fā)的基于膠體金平臺的豬瘟病毒抗體快速測試卡,操作簡單、快速,能夠幫助豬場在現(xiàn)場完場豬瘟病毒的檢測或篩查,為豬瘟凈化提供依據(jù)。


操作簡單:只需要三步即可完成,即采集血液分離血清;向膠體金測試卡上滴加血清,再滴加2滴稀釋液到加樣孔;靜止10-15分鐘觀察結(jié)果。


快速:10-15分鐘即可完成。


對人員無要求:任何人一看就會,不需要專業(yè)的學(xué)歷。


結(jié)果判斷:一目了然,易于判斷。


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四、定期評估豬瘟抗體水平并及時(shí)對免疫程序進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化


由于各養(yǎng)殖場的管理水平、 營養(yǎng)狀態(tài)、所用疫苗質(zhì)量、免疫程序等的差異,導(dǎo)致豬瘟抗體水平參差不齊。另外,再加上多種微生物的混合感染,比如豬瘟可以與藍(lán)耳、偽狂犬、流行性腹瀉、副豬嗜血桿菌等病原發(fā)生二重、三重甚至多重感染。這種混合感染造成的免疫抑制嚴(yán)重,影響了豬瘟疫苗的免疫效果。


總的來說,定期評估豬瘟抗體效價(jià)水平的意義:


評估免疫效果:疫苗免疫后效果到底如何,用事實(shí)說話。一個(gè)群體抗體合格率要在80%以上,才能抵抗疫病的爆發(fā)。而有些豬場免疫后保護(hù)水平顯然不足以抵抗野毒感染。曾有人在2013年評估不同品牌的豬瘟疫苗,發(fā)現(xiàn)抗體陽性率從27%-85%,可見疫苗的質(zhì)量也是參差不齊的。根據(jù)豬瘟抗體的檢測結(jié)果查缺補(bǔ)漏,及時(shí)調(diào)整。


優(yōu)化免疫程序:通常情況下,規(guī)模豬場商品豬首免在25-35日齡,二免在60-70日齡;種豬初免在25-35日齡,60-70日齡二免是比較合適的。但是具體免疫的時(shí)機(jī),應(yīng)該通過抗體監(jiān)測、抗體的消長規(guī)律來具體確定并制定符合場內(nèi)的免疫程序。


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豬瘟病毒抗體快速檢測卡


豬瘟抗體的檢測原則上以中和抗體為佳,但是中和抗體操作復(fù)雜,不利于推廣,因此現(xiàn)在常用總抗體的檢測代替中和抗體。目前市場上常用的是進(jìn)口的豬瘟抗體ELISA試劑盒。


賽諾利康生物開發(fā)的豬瘟病毒抗體快速檢測卡,依然基于膠體金技術(shù)平臺,膠體金方法與ELISA方法相比:操作簡單,一學(xué)就會;檢測快速,15分鐘內(nèi)出結(jié)果;檢測報(bào)告清晰易懂,不必高深的專業(yè)知識。膠體金檢測試紙?zhí)貏e適合現(xiàn)場、基層檢測使用。


五、結(jié)束語


用疫苗免疫進(jìn)行豬瘟凈化前,首先要控制傳染源。通過豬瘟病毒抗體快速檢測卡或PCR等方法現(xiàn)場篩查陽性豬,必要時(shí)采用特異性更好的方法進(jìn)行確認(rèn),根據(jù)確認(rèn)結(jié)果決定是否淘汰陽性豬;


定期評估抗體水平,有助于及時(shí)優(yōu)化、調(diào)整免疫程序,控制豬瘟感染。豬瘟抗體膠體金測試卡操作簡單、快速,非常適合現(xiàn)場、基層使用。


賽諾利康生物技術(shù)(北京)有限公司


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