小反芻獸疫（Peste des Petits Ruminants, PPR）俗稱“羊瘟”，是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性病毒性傳染病，主要感染山羊和綿羊，偶爾感染牛、水牛和駱駝，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。該病是OIE法定報告動物疫病，也是全球計劃根除的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。
1．突然發(fā)熱，第2~3天體溫達40~42 ℃高峰。發(fā)熱持續(xù)3d左右，病羊死亡多集中在發(fā)熱后期。
2．眼、鼻大量排出分泌物，最初水樣的眼、分泌物日益增多變成膿性然后結(jié)干，動物發(fā)出惡臭。由于鼻孔被凸起的結(jié)干的鱗屑覆蓋，動物打噴嚏和咳嗽。呼吸急促，呼吸困難，排痰性咳嗽和眼睛的卡他性分泌物。3．口腔粘膜充血，口腔上皮和鼻腔粘膜出現(xiàn)大量部分粘連的極微小的略灰色壞死點，壞死組織脫落后形成界線分明的淺糜爛斑。上皮破損偏好部位為嘴唇、齒齦、牙板、舌頭以及母羊陰戶的陰唇表面�？谇黄茡p可能伴有大量流涎。4．發(fā)熱2~3 d后病畜開始腹瀉，伴隨嚴重脫水、消瘦、虛脫。懷孕母羊可發(fā)生流產(chǎn)。5．特急性病例在發(fā)熱開始的4~6 d內(nèi)死亡。亞臨床型病例癥狀較輕，病畜在生病10 ~14d以后康復。1．嘴唇充血，口腔破損程度不等，較輕的只有一處潰瘍，嚴重的出現(xiàn)廣泛的潰瘍性及壞死性口腔炎，涉及牙板、硬腭、頰粘膜、乳突和舌頭喙部背面。粘膜病變可延伸至咽部，偶爾在網(wǎng)胃和瘤胃交界處。2．上呼吸道粘膜可能嚴重充血，伴有鼻孔和氣管的潰瘍。支氣管肺炎，肺尖肺炎。皺胃粘膜出現(xiàn)嚴重的充血和潰爛。偶爾，整個腸道出現(xiàn)彌散性的充血，但是，多數(shù)情況僅局限于十二指腸、回腸、盲腸和結(jié)腸上部分。常見回盲腸瓣膜出血。大腸縱向折疊頂部偶爾出現(xiàn)嚴重的出血形成斑馬樣條紋。3．腸淋巴組織壞死、萎陷。腸系膜淋巴組織輕微腫大、水腫，脾可能腫脹。上呼吸道粘膜可能嚴重充血，伴有鼻孔和氣管的潰瘍。支氣管肺炎，肺尖肺炎。肺部淋巴結(jié)腫脹并水腫。4．結(jié)膜出現(xiàn)膿性結(jié)膜炎。腎和膀胱可見充血。母羊可見陰戶和陰道糜爛。5．組織學上可見肺部組織出現(xiàn)多核巨細胞以及細胞內(nèi)嗜酸性包含體。
備注：“+”表示可出現(xiàn)，“—”表示一般無病變。
(1) 選擇處于發(fā)熱期（體溫40~41℃）、排出水樣眼分泌物、出現(xiàn)口腔潰瘍、無腹瀉癥狀的活畜采集樣品。采集結(jié)膜棉拭子2個、鼻粘膜棉拭子2個、頰部粘膜棉拭子1個。(2) 無菌采集血液10mL，用常規(guī)方法分離血清。(3) 選擇剛被撲殺或者死亡時間不超過24h的病畜采集組織樣品。無菌采集腸系膜和支氣管淋巴結(jié)各3~4個，脾、胸腺、腸粘膜和肺等組織各約25~50g。處理棉拭子、組織樣品或肉制品，接種Vero細胞，在37℃含5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。接種后5d內(nèi)，細胞應出現(xiàn)細胞病變效應，表現(xiàn)為細胞融合，形成多核體。如接種5~6d后不出現(xiàn)細胞病變，應將細胞培養(yǎng)物盲傳三代。將出現(xiàn)細胞病變的細胞培養(yǎng)物，使用RT-PCR 方法和熒光定量 RT-PCR方法做進一步鑒定。樣品出現(xiàn)細胞病變，而且RT-PCR方法或?qū)崟r熒光RT-PCR方法鑒定結(jié)果為陽性，則判為小反芻獸疫病毒分離陽性，否則判為陰性。可以采用針對N基因的引物對小反芻獸疫病毒進行核酸檢測，引物的靶基因、位置、序列和擴增產(chǎn)物的大小見表4。
針對小反芻獸疫病毒N基因保守序列區(qū)段設計引物和探針，引物和探針的位置和序列見表5。表5 用于小反芻獸疫病毒實時熒光定量RT-PCR檢測的引物和探針
中間孔加陽性抗血清，周邊3個孔加陽性抗原，1個孔加陰性抗原，另2個孔加待檢抗原，待檢抗原、陰性抗原和陽性抗原交替排列。對流免疫電泳是檢測病毒抗原的最快速的方法。水平電泳槽的兩個部分由一個橋連接，電泳儀連接到一個高壓電源。1%~2%（w/v）瓊脂或瓊脂糖溶解在0.025M醋酸巴比妥緩沖液中，將凝膠分散在載玻片上，凝膠上打6~9對孔。每對孔加反應物，血清在正極，抗原在負極。將載玻片置于連接橋上，兩端由濕濾紙與緩沖液相連接。電泳30~ 60min后，在強光下觀察，每對孔間出現(xiàn)1~3條沉淀線的為陽性反應，陰性對照應無反應。免疫捕獲ELISA采用幾種抗小反芻獸疫病毒N蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體包被ELISA板，以生物素標記的小反芻獸疫病毒N蛋白單克隆抗體作為檢測抗體，以酶標記親和素為顯色劑，檢查被檢樣品中存在的小反芻獸疫病毒；也可采用抗小反芻獸疫病毒多克隆抗體作為捕獲抗體包被ELISA板，以酶標記抗小反芻獸疫病毒N蛋白單克隆抗體作為檢測抗體和顯色劑，檢查被檢樣品中存在的小反芻獸疫病毒。該方法的特異性好，可用于小反芻獸疫和牛瘟的病原學鑒別診斷，還可用于疫苗生產(chǎn)質(zhì)量的監(jiān)控。但成本太高。PCR-ELISA通過ELISA，使用標記的探針在一塊板上進行檢測。小反芻獸疫病毒的PCR-ELISA是種高靈敏度的基于小反芻獸疫病毒N基因的檢測方法。這種方法的靈敏度與傳統(tǒng)的RT-PCR相比高10倍。臨床試驗中，比免疫捕獲ELISA更適于檢測早期感染的病毒。同時能夠有效區(qū)分小反芻獸疫病毒與牛瘟病毒。
酶聯(lián)免疫吸附試驗包括競爭ELISA、間接ELISA。具有快速、高通量等優(yōu)點，已逐漸成為小反芻獸疫血清學檢測的*方法。競爭ELISA是世界動物衛(wèi)生組織認可的小反芻獸疫血清學檢測試驗。競爭ELISA已有商品化試劑盒，一種包被抗原是桿狀病毒表達的重組N蛋白，競爭單抗是抗小反芻獸疫病毒N蛋白單抗；還有一種的包被抗原為純化的全病毒，競爭單抗為抗小反芻獸疫病毒H蛋白單抗。間接ELISA以重組小反芻獸疫N蛋白為檢測抗原的間接ELISA試劑盒，和競爭ELISA具有良好的符合率，但不能區(qū)分牛瘟病毒和小反芻獸疫病毒產(chǎn)生的抗體。由于我國已消滅牛瘟，間接ELISA適合我國小反芻獸疫流行病學調(diào)查。中心孔加抗原，1、3、5孔加標準陽性血清；2、4、6孔加被檢血清。每個平皿設一組對照，即1、3、5孔加標準陽性血清，2、4、6孔加陰性血清。加樣后靜置10min，移入濕盒內(nèi)于室溫（22~25℃）反應。將膠體金標記的SPG（鏈球菌G蛋白）固定于金標墊，檢測線為純化的PPRV N蛋白,對照線為兔抗SPG。檢測時，陽性樣品中的抗PPRV抗體與膠體金標記SPG特早性地結(jié)合，在NC膜上移動時，被檢測線上的PPRV N蛋白捕獲，膠體金顆粒聚集于此，形成紅色的條帶，即檢測線。相反，陰性樣品中不含抗PPRV抗體，在檢測線處不形成紅色條帶。對照線試劑兔抗SPG與膠體金標記SPG結(jié)合，捕獲金標復合物，形成對照線。（一）《全國小反芻獸疫消滅計劃（2016—2020年）》
免疫動物群體以病原學監(jiān)測為主，非免疫動物群體以血清學監(jiān)測為主。對病原學陽性動物及同群動物進行撲殺和無害化處理，并做好追溯排查等防控工作；對血清學陽性的非免疫動物進行撲殺和無害化處理，對同群動物進行全面排查，并隔離觀察至少21天，在隔離期內(nèi)每周開展檢測。省級和地市級動物疫病預防控制機構(gòu)以病原學監(jiān)測為主，縣級動物疫病預防控制機構(gòu)以血清學監(jiān)測為主。各地動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)應結(jié)合當?shù)匦》雌c獸疫風險評估狀況開展產(chǎn)地檢疫。（二）《2019年國家動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查計劃》——小反芻獸疫監(jiān)測計劃對31個省（自治區(qū)、直轄市）和新疆生產(chǎn)建設兵團的山羊、綿羊、野羊于春季（4~5月份）、秋季（10~11月份）各開展一次免疫抗體集中監(jiān)測，各省制定年度監(jiān)測方案做好常規(guī)監(jiān)測。抗體檢測使用競爭ELISA和阻斷ELISA方法。病原檢測采集拭子或者組織樣品，采用RT-PCR或者實時RT-PCR方法進行檢測。
