一、為什么需要檢測(cè)非洲豬瘟抗體？

答：目前非洲豬瘟在我國處于流行后期，流行毒株由早期的強(qiáng)毒株轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)在的變異株（基因缺失株，自然變異株、自然弱毒株）。生豬感染變異株后，排毒滴度低，呈間隙排毒，可能檢測(cè)不到核酸（核酸及抗原檢測(cè)為陰性），一旦處于應(yīng)激狀態(tài)，有排毒風(fēng)險(xiǎn)，但是豬體內(nèi)已產(chǎn)生抗體，可持續(xù)存在。此種情況下輔以抗體檢測(cè)，有助于更好的對(duì)感染非洲豬瘟的豬群進(jìn)行“拔牙”處理。

二、非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)卡的用途有哪些及結(jié)果如何解讀？

答：非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)卡檢測(cè)的是非洲豬瘟病毒抗體，適用于豬場對(duì)非洲豬瘟的“拔牙“處理（抗原抗體雙陰性場地），或者對(duì)耐過豬適時(shí)的進(jìn)行監(jiān)測(cè)檢測(cè)（主要是各種應(yīng)激環(huán)境下是否重新排毒的監(jiān)測(cè)）。需要注意的是，非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)卡是用作對(duì)ASFV核酸檢測(cè)陰性疑似病例的補(bǔ)充檢測(cè)指標(biāo)，或疑似病例診斷中與核酸檢測(cè)協(xié)同使用，并不能作為ASFV感染的確診和排除的依據(jù)。

1、當(dāng)非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡檢測(cè)為陽性：

①有臨床癥狀、進(jìn)一步核酸或抗原檢測(cè)陽性，感染非洲豬瘟。

③無臨床癥狀、進(jìn)一步核酸或抗原檢測(cè)陽性，進(jìn)行病毒分離，確定感染還是耐受。

2、當(dāng)非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡檢測(cè)為陽性：

①無臨床癥狀、進(jìn)一步核酸或抗原檢測(cè)陰性，未感染非洲豬瘟。

②有臨床癥狀、進(jìn)一步核酸或抗原檢測(cè)陽性，感染非洲豬瘟早期。 

3、當(dāng)非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡檢測(cè)結(jié)果判定為可疑時(shí)（檢測(cè)線顯色非常弱，呈現(xiàn)淺灰色—結(jié)合判定參照卡），應(yīng)結(jié)合豬只臨床癥狀綜合判定，如無癥狀7天后復(fù)檢一次，如顏色無變化，判定陰性，如果顏色加深則判定為陽性。

三、非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡檢測(cè)抗體是否可以采集口咽拭子進(jìn)行檢測(cè)？

答：不可以，目前絕大多數(shù)的抗體檢測(cè)試劑盒也均不能采用口咽拭子進(jìn)行抗體檢測(cè)。因?yàn)榭谘适米又饕�獲取的是豬只口腔或咽部黏膜表面分泌的粘液，而機(jī)體黏膜表面產(chǎn)生的抗體主要是lgA(一種免疫球蛋白)，同時(shí)分泌量不高，通過口咽拭子獲取的lgA就更加少，目前檢測(cè)試紙卡還不能達(dá)到如此之高的靈敏度。（核酸檢測(cè)之所以能夠通過口咽拭子檢測(cè)，是因?yàn)闄z測(cè)過程進(jìn)行了核酸的無限次擴(kuò)增，最后達(dá)到了可檢測(cè)的量。而機(jī)體獲取的抗體，以目前的技術(shù)是無法擴(kuò)增的。）而機(jī)體在感染的情況下在血液中能產(chǎn)生的大量的抗體是lgG，所以對(duì)于抗體的檢測(cè)，采血進(jìn)行檢測(cè)是最為有效的方式。

四、采血檢測(cè)的注意事項(xiàng)有哪些？

答：目前非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡主要樣本是血清或血漿，因此通過尾根或者耳靜脈采血獲得一定量的血液樣本應(yīng)當(dāng)盡快處理后獲得血清或者血漿，避免溶血的發(fā)生，獲得血清或血漿如果不馬上檢測(cè)，則盡快放在4℃左右環(huán)境存儲(chǔ)，短期（1-2天）不檢測(cè)，應(yīng)置于-20℃以下存儲(chǔ)。

五、非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡的準(zhǔn)確性如何？

答：非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡在3家省級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室單位（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、湖南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）做過驗(yàn)證試驗(yàn)（靈敏度、特異性、符合率等），其中靈敏度結(jié)果為非洲豬瘟標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的稀釋1：28仍然能檢出；特異性的結(jié)果為與其他豬病抗體無交叉反應(yīng)；在符合率方面，與進(jìn)口ELISA試劑盒（西班牙INGENASA非洲豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒及法國IDVET非洲豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒）的符合率均在90%以上。

六、為什么同時(shí)采用p30和p72檢測(cè)抗體？

答：p72和p30是已知的誘導(dǎo)中和抗體（非典型）的主要ASFV抗原，其中p72（p73）蛋白是病毒核衣殼的重要組成部分。產(chǎn)生于病毒感染晚期，占ASFV總蛋白的32%，抗原性保守穩(wěn)定，對(duì)自然感染具有免疫原性。而p30（p32）蛋白在病毒感染早期合成，在感染后4h胞漿內(nèi)即可檢測(cè)到，感染后12h減少，與晚期蛋白開始合成相一致，但是新合成的p30在感染晚期每個(gè)階段都能檢測(cè)到，能夠誘導(dǎo)較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答。同時(shí)采用兩種蛋白檢測(cè)抗體相對(duì)而言提高了對(duì)非洲豬瘟抗體檢測(cè)的靈敏性和特異性。

七、非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡與ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果不一致的原因有哪些？

答：1、兩種方法包被的抗原可能不一樣。如西班牙ELISA試劑盒包被的是p72蛋白，檢測(cè)的是抗p72的抗體；而非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試紙卡中包被的p30+p72蛋白，檢測(cè)的是抗p30和抗p72抗體，因此兩個(gè)檢測(cè)的抗體是不一樣的。p30在非瘟病毒感染的早期合成（早于p72），且一直持續(xù)整個(gè)感染期。所有兩者的檢測(cè)結(jié)果有時(shí)存在差異。

2、由于兩者的原理并不完全一致，ELISA是采用間接法或阻斷法測(cè)定，試紙卡是雙抗原夾心法測(cè)定，二者的制備工藝也不一樣。另外還有可能存在部分干擾因素對(duì)試紙卡和ELISA的影響結(jié)果并不完全一致，因?yàn)镋LISA可以通過每一步的洗板除去部分干擾物質(zhì)，試紙卡沒有此過程，靠樣品墊過濾。所以兩者的檢測(cè)結(jié)果可能有差異。

干擾物質(zhì)種類：

①血清樣本中內(nèi)源性干擾物質(zhì)如嗜異性抗體，補(bǔ)體等。

②血清中外源性干擾物質(zhì)包括樣本溶血、樣本被*污染、樣本貯存時(shí)間過長和樣本凝固不全等。