禽白血病病毒(ALV)屬反轉(zhuǎn)錄病毒科，C型腫瘤病毒屬禽白血病/肉瘤病毒群。并分為A、B、C、D和E 5個(gè)亞群。A亞群是最常見的，而且與淋巴白血病最密切相關(guān)。B亞群在雞群中偶爾也可分別到�？墒�c和D亞群則十分罕見。E亞群是最常見的內(nèi)源性白血病病毒，它曾經(jīng)病毒基因方式永久地與宿主細(xì)胞DNA結(jié)合在一起，簡直與腫瘤構(gòu)成無關(guān)，其致病性也很低。各亞群病毒都具有一起的群特異性(gs)抗原，這種抗原可以從雞蛋的卵清中、雞體的各種組織中以及體液中檢測(cè)到。

此外，從幾個(gè)種類的野雞中分別到的禽白血病病毒歸屬于F和G亞群。它們與從雞中分別到的白血病病毒不同。從匈牙利鷓鴣中分別到的內(nèi)源性病毒歸屬于H亞群，從 Gambel鵪鶉中分別的內(nèi)源性病毒歸屬于I亞群。許多禽白血病/肉瘤病毒實(shí)驗(yàn)室毒株通常是缺陷型的和短少囊膜基因，它們的繁殖需求依托它們亞群中的輔佐白血病病毒。

禽白血病病毒（ELISA法）檢測(cè)試劑盒

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測(cè)。 本試劑盒是選用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（DAS-ELISA）原理來檢測(cè)禽白血病病毒的P27抗原。檢測(cè)時(shí)，在相應(yīng)的反應(yīng)孔中參加陰、陽對(duì)照品和待測(cè)樣品，經(jīng)溫育后，若樣品中含有P27抗原，則與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物，反之則不能結(jié)合。洗刷后，參加的酶標(biāo)記物與包被板上的抗原抗體復(fù)合物產(chǎn)生特異性結(jié)合。再次洗刷后參加底物，酶催化底物反應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色，顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關(guān)，從而達(dá)到快速檢測(cè)的目的。

操作辦法

一：試劑制造

a）0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液：精確稱取氯化鈉 8.0 g、氯化鉀 0.2 g、磷酸氫二鈉1.14 g和磷酸二氫鉀0.24 g，參加去離子水溶解并定容至1 L。

b）洗刷工作液：運(yùn)用前，濃縮的洗刷液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20-25℃），并搖擺，使沉積溶解（*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min），然后用蒸餾水作25 倍稀釋（例如：30 mL 的濃縮洗刷液加上 720 mL 蒸餾水）勻，稀釋好的洗刷液2-8℃可存放7日。

二：樣品處理

蛋清：取全蛋，破碎后，直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子：取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣，然后放入1 mL PBS溶液（0.01mol/L，pH 值 7.4）中，-20℃以下冰箱中凍融一次，待其恢復(fù)至室溫后，取 100 μL 進(jìn)行檢測(cè)。 疫苗：疫苗稀釋液將疫苗溶解，再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后，取100μL進(jìn)行檢測(cè)。 胎糞：無需稀釋，可以直接用于檢測(cè)，若樣品中含有沉積或雜質(zhì)，需在2000-3000 r/min，離心 10 min，取 100 μL 上清進(jìn)行檢測(cè)。

三：操作步驟

取酶標(biāo)板（根據(jù)樣品*，可拆開分次運(yùn)用），陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和待檢樣品各取100 μL加至相應(yīng)微孔中，蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標(biāo)板10 s，充分混

勻，室溫下（25±2℃）避光反應(yīng)60 min。

注：陰、陽性對(duì)照各設(shè)2孔，待檢樣品設(shè)1孔。

甩掉孔中的溶液，每孔參加稀釋好的洗刷液300μL，震動(dòng)洗刷4次，每次30s 左右，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗刷液。 每孔參加100μL酶標(biāo)記物工作液，蓋好蓋板膜，室溫下（25±2℃）避光反應(yīng)60 min。 棄去孔中的溶液，洗刷4次，辦法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻，參加孔中，100 μL/孔，蓋上蓋板膜，室溫下（25±2℃）反應(yīng)15 min。

注：底物工作液也可提早制造，但制造完后需5 min內(nèi)運(yùn)用。

每孔參加終止液100μL，5 min內(nèi)測(cè)定成果。

注：若終止液呈現(xiàn)絮狀結(jié)晶，可37℃加熱，待其溶解后運(yùn)用。

成果斷定

在酶標(biāo)儀上讀各孔OD650nm值，計(jì)算出陰性對(duì)照孔OD均值NC和陽性對(duì)照孔OD均值PC。

注：NC值＜0.200且0.500＜PC值≤2.000，實(shí)驗(yàn)成果才有效。否則，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

依照公式計(jì)算出S/P值：S/P=（SC-NC）/（PC-NC）。

注：SC為被檢樣品孔OD值。

如果S/P＜0.17，說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白；如果S/P≥0.17，說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白。

有效期

貯存辦法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個(gè)月。